Определение количества эритроцитов

Содержание

1.4.2 Определение количества эритроцитов

Определение количества эритроцитов

Оборудование и реактивы:

1. смесители (меланжеры) или пробирки для подсчета эритроцитов.

2. 3% – раствор NaCl (для разведения эритроцитов) или жидкость Гайема.

3. 3% раствор уксусной кислоты.

Смесители представляют собой капиллярную пипетку с расширением – ампулой, содержащей бусинку, способствующую смешению крови с разводящей жидкостью. Смесители, предназначенные для подсчета эритроцитов, обладают капилляром более тонкого калибра и более объемистой ампулой на них нанесены метки одна – 0,5 другая – перед входом в ампулу – 1.0, третья – у выхода из ампулы – 101.

При набирании крови до метки 0,5 она окажется разведенной в 200 раз, при набирании до 1,0 – в 100 раз. Для разведения эритроцитов применяют 3% раствор поваренной соли или жидкость Гайема, в которой лучше сохраняется форма эритроцитов. Нанесены три метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10, либо в 20 раз (чаще разводят в 20 раз).

Счетная камера.

Для подсчета форменных элементов наиболее часто применяется камера типа Бюркера с выгравированной на ней сеткой Горяева. Счетная камера состоит из толстого предметного стекла с особым углублением. На дне углубления счетной камеры выгравирована сетка, в клетках которой и подсчитываются форменные элементы.

По краям углубления имеются возвышения, куда накладывается покровное стекло. Между нижней поверхностью этого стекла и дном углубления образуется замкнутое пространство, которое и представляет собой счетную камеру. Глубина камеры соответствует 0,1 мм.

Счетная камера типа Бюркера разделена пополам глубокой канавкой и имеет на каждой половине сетку Горяева, что позволяет сразу считать 2 капли, не заполняя вновь камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15Х15), 25 из которых разделены на малые, по 16 в каждом; имеются также пустые квадраты, собранные в группы по 4 квадрата.

Всего в сетке 100 больших пустых квадратов, собранных в 25 групп (5X5). Каждая сторона маленького квадратика равна 1/20 мм, а так как высота камеры составляет 0,10 мм, то объем равен 1/4000 ммЗ.

Ход исследования:

Для подсчета эритроцитов берут смеситель для эритроцитов, надевают резиновую трубочку, легким насасыванием набирают кровь из укола до метки 0,5.

Избыток крови удаляют фильтровальной бумагой, после чего кончик смесителя погружают в приготовленный заранее флакон с 3% раствором поваренной соли или раствором Гайема и насасывают раствор, заполняя всю ампулу до метки 101.

Тотчас снимают резиновую трубку, зажимают смеситель по длине между большим и указательным или средним пальцем и встряхивают в течение 3 минут. После этого заполняют счетную камеру, сливают 1-2 капли и выпускают последующую каплю на сетку.

При работе с пробирками для подсчета эритроцитов, наливают 4 мл 3% раствора поваренной соли или жидкости Гайема и в нее выпускают 0,02 мл. крови, отмеренной пипеткой от гемометра Сали. Для подсчета белых кровяных элементов в пробирку наливают 0,4 мл 3 – 5% раствора уксусной кислоты и 0,02 мл крови. Энергично встряхивают пробирки, затем в жидкость опускают пипетку из гемометра Сали и, набрав содержимое, заполняют счетную камеру.

Заполнение счетных камер:

Хорошо вымытое и вытертое шлифованное покровное стекло накладывают на выступающие боковые края. Мякотью больших пальцев покровное стекло притирают, двигая вверх и вниз, все время плотно прижимая, пока не появятся, так называемые, Ньютоновы кольца.

Перед заполнением камеры вновь энергично встряхивают смесители, выпускают 2 капли на фильтровальную бумагу, а третьей заполняют щелку между камерой и покровным стеклом. Жидкость по капиллярности засасывается между ними и заполняет пространство над сеткой.

Жидкость при заполнении камеры не должна затекать в желобки, если это стучится, то ее удаляют фильтровальной бумагой.

Подсчет производят спустя 1-2 минуты (когда эритроциты осядут на дно камеры), пользуясь объективом 40Х и окуляром 7X, либо объективом 8Х и окуляром 15Х.

Чтобы не сбиться со счета, придерживаются определенной последовательности счета: передвигая из квадрата в квадрат по горизонтали один ряд слева направо, следующий – справа налево.

Считают, помимо находящихся внутри квадрата, все эритроциты, лежащие на двух линиях, например, на левой и верхней, и пропускают все лежащие справа и снизу. Считать эритроциты надо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких.

Чтобы избежать неточности, вследствие не вполне равномерного распределения крови в камере, выбирают для подсчета не 5 рядом лежащих квадратов, а продвигаются по всей сетке.

Количество эритроцитов в 1 ммЗ (искомое) вычисляют следующим образом: единицей счета всегда, при всяком подсчете, в любой сетке служит малый квадрат. Объем его, как было указано, равен 1/4000 мм3.

Сосчитав эритроциты в 5 больших квадратах (80 малых квадратов), делят это количество на 80 и умножают на 200 (степень разведения крови) и на 4000 (чтобы получить количество клеток во всем кубическом миллиметре); практически, следовательно, полученное число умножают на 10000 (прибавляют четыре нуля).

f2. Практическая часть

Согласно исходным данным из РГЗ№1 (см. табл.1), были вычислены данные, указанные в таблице 2.

Таблица 2. Полученные данные РГЗ№1.

№ задачиОбъём 1 эритроцита, мкм3Масса гемоглобина в 1 эритроците, пгКонцентрация гемоглобина в цитоплазме эритроцитов, %
11761,624,239,3
23098,625,726,0
337106,626,825,2
44670,922,932,3
55183,527,633,0
67076,419,725,7
78278,822,728,9
89190,228,932,0
Среднее83,324,830,3

Комплексная механизация лесосечных работ

Согласно правилам рубок главного пользования общая площадь под лесопогрузочными пунктами…

Комплексная механизация технологических процессов снижения себестоимости молока за счет улучшения качества приготовления кормовых смесей

2.3 Определение производительности ПТЛ (машины), подбор машин для выполнения технологических операций и определение их количества

На основании данных рациона и поголовья животных, обслуживаемых кормоцехом, рассчитываем количество кормов подлежащих обработке. Согласно рациона кормления КРС (см. пункт 1.4), суточная потребность в кормосмеси составит: 81142,2 кг…

Механизация технологического процесса водоснабжения и поения на откормочной свиноферме

2.3 Определение производительности ПТЛ, подбор машин для выполнения технологических операций и определение их количества

Расчет потребности в воде При определении потребности в воде необходимо знать среднесуточный расход воды всеми потребителями, который определяется по формуле: , м3 где qi – суточная норма расхода воды одним потребителем, м3…

Механизация технологического процесса уборки навоза на молочной ферме крупного рогатого скота

f2.3 Определение производительности ПТЛ, подбор машин для выполнения технологических операций и определение их количества

Для доения коров на привязи принимаем доильную установку АДМ-8. Число доильных аппаратов NД, необходимых для обслуживания поголовья дойных коров в одном коровнике определим по формуле: , шт., (2…

Проект комплекса по производству молока с разработкой технологической линии доения и первичной обработки молока

1.1 Определение количества доильных установок

Концентрация молочного скота на фермах, кратность доения коров и организация труда дояров – важнейшие факторы производительного использования доильных установок…

Проект комплексной механизации молочной фермы мощностью 100 голов с привязным содержанием на сменной подстилке

2.1 Определение количества поголовья и скотомест

Количество поголовья и количество скотомест в помещениях для содержания различных групп скота определяется по формуле: [1] nci = Nф * Kpi ; (1) где nci – количество поголовья; Nф – мощность фермы; Kpi – расчетный коэффициент…

Проект кормового цеха молочной фермы

3.3 Определение трудоемкости ТО и определение количества обслуживающего персонала

Трудоемкость ЕТО, ТО-1 и ТО-2 берут из типовых норм времени на техническое обслуживание, ремонт и монтаж машин и оборудования животноводческих ферм [4, 7], а годовую наработку машин – из технологической карты на получение продукции животноводства…

Проект цеха сушки пиломатериалов на базе лесосушильных камер ЛСК-45

2.3 Определение необходимого количества камер

Необходимое количество камер определяется по формуле: ,(1,18) где УУ – общий объем условного материала, подсчитанный по формуле; Пу – годовая (плановая) производительность одной камеры в условном материале…

Проектирование откормочного цеха овцефермы с технологической линией приготовления грубых кормов

f2.3 Определение производительности ПТЛ (машины), подбор машин для выполнения технологических операций и определение их количества

Рассчитаем суточный выход навоза по формуле: , кг, где – суточный выход навоза от одной головы i-ой группы животных, кг: для молодняка от 6 до 14 мес =14 кг; для молодняка от 14 до 18 мес =26 кг; – суточная норма внесения подстилки…

Ферма на 178 голов молодняка крупного рогатого скота

4.1 Определение количества скотомест

Животноводческое предприятие рассчитано на 180 голов. Стадо состоит из трех групп животных. Нетелей 14 голов, телят в возрасте от 12 до 18 месяцев 66 голов, телят в возрасте от 6 до12 месяцев 100 голов…

Физиология сельскохозяйственных животных

1.4 Методика подсчёта количества эритроцитов в единице объёма крови в камере Горяева

Физиология сельскохозяйственных животных

1.3 Определение количества гемоглобина

Количество гемоглобина определяют колориметрическим методом и выражают в грамм-процентах (г%), а затем с помощью коэффициента пересчета по Международной системе единиц (СИ), который равен 10, находят количество гемоглобина в граммах на литр (г/л)…

Источник: http://agro.bobrodobro.ru/30590

Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева

Определение количества эритроцитов

Состав крови образован плазмой и форменными компонентами, большую часть из которых составляют эритроциты. Зрелые кровяные клетки не содержат ядра и имеют двояковогнутую форму.

их функция – транспортировка газов в тканях органов.

Уровень эритроцитарных клеток в крови человека зависим от таких факторов, как пол и возраст, но является величиной достаточно постоянной, поэтому колебание их количества дает ценную информацию в процессе диагностирования.

Для вычисления количества кровяных клеток чаще всего используется унифицированный метод подсчета эритроцитов с использованием оборудования, известного, как камера Горяева, либо с помощью электронных счетчиков автоматического типа. Оба способа на данный момент широко используются и в ежедневной лабораторной практике, и при научных изысканиях, так как погрешность результатов, полученных в ходе их применения, минимальна.

Строение камеры Горяева

Оптическое устройство – камера Горяева позволяет вычислить количество кровяных клеток в определенном объёме специальной жидкости. Идея создания устройства принадлежит русскому профессору Горяеву Н. К.

Главный элемент устройства – прозрачное предметное стекло с камерой, образованной углублением в форме прямоугольника, поверхность которой покрыта специальной микроскопической сеткой, и тонкое покровное стекло. Высокая точность результатов подсчета достигается благодаря повышенному объёму сетки в сравнении с аналогичными устройствами других типов.

Сетка устройства имеет площадь 9 мм2, размер одной стороны составляет 3 мм. Поверхность данного элемента образована квадратами общим числом в 225 шт. Из них одна сотня квадратов поделена на прямоугольники, еще столько же – не разграфлено, а 25 штук поделены на 16 более маленьких. Площадь 1 малого квадрата составляет 1/400 мм2, область над ним имеет объём 1/4000 мм3.

Разбавление крови с целью исследования

Определение количества эритроцитов состоит из нескольких последовательных действий. Первым этапом становится разведение определенного объёма крови в реагенте. Делается это в связи с огромным числом форменных элементов.

В качестве реагента чаще всего выступает раствор хлорида натрия концентрацией 0,9%. При необходимости альтернативой служит 5% раствор натрия цитрата. Процедуру разбавления крови выполняют в пробирке или в специальном смесителе, называемом меланжером.

Внимание! Использование растворов с более высокой или низкой концентрацией исключено, так как повлечет за собой разрушение кровяных клеток.

Разбавление крови в меланжере

Меланжером называется изготовленный из стекла градуированный капилляр длинной 10 см с расширением на конце, внутри которого расположен шарик. Последний выполняет важную функцию – равномерное смешивание раствора и крови. Цвет шарика меланжерного капилляра будет красным, если он предназначен для эритроцитов, и белым – для работы с лейкоцитами.

Методика подсчета эритроцитов позволяет проводить процедуру исследования и со стабилизированной кровью, и с нестабилизированным материалом сразу после его забора у пациента.

Кровь набирают меланжерным капилляром до деления 0,5, после чего кончик смесителя очищают от крови с помощью марли либо ватки и следующим действием набирают разбавляющий раствор до деления 101.

Перекрыв пальцами отверстия капилляра, полученный образец тщательно смешивают около 3 минут. В счётную камеру помещают четвёртую каплю, предварительно удалив первые три на марлю.

Таким образом получают разбавление крови в 200 раз.

Разбавление крови в пробирке

При пробирочном методе разбавления крови исследуемый материал разводят в 200 раз следующим образом: 4 мл раствора хлорида натрия помещают в пробирку, после чего добавляют 0,02 мл крови.

Для этого забор материала производят пипеткой, кончик которой протирают ваткой или другой тканью. Образец крови помещают на дно пробирки, пипетку промывают ближе к поверхности раствором хлорида натрия. Готовый образец перемешивают и оставляют до дальнейшего этапа исследования, но менее чем на 3 часа.

Подсчет количества эритроцитов

Камера Горяева обязательно располагается горизонтально. Всю площадь сетки аккуратно заполняют разведенным образцом. Важно проследить, чтобы не образовались пузырьки воздуха, ведь их наличие значительно исказит результат. В таком положении камера остается в течение одной минуты с целью оседания кровяных клеток.

Унифицированный метод подсчета эритроцитов проходит при среднем увеличении посредством микроскопического осмотра. Подсчет числа эритроцитов в камере Горяева ведут в 5 больших квадратах, поделенных на 16 малых. Начало отсчета рекомендовано производить с большого квадрата, находящегося вверху слева, и далее по диагонали.

Важно! Чтобы количество клеток, находящихся на линиях малых квадратов, не было подсчитано дважды, рекомендуют пользоваться правилом Егорова: в каждом квадрате вести подсчет по двум определенным линиям (верхней и левой).

Правило Егорова

Начинают высчитывание клеток в малых квадратах в верхнем ряду слева направо от 1-го до 4-го в этом ряду. Переходя к следующему ряду, подсчет ведут в обратном порядке – справа налево. Переход к подсчету клеток в следующем большом квадрате производят после вычисления эритроцитов в этих 16 малых квадратах.

Непосредственно расчет числа эритроцитов ведут по формуле, отображенной на рисунке №2.

Формула расчета клеток

Обозначения в данной формуле расшифровываются следующим образом:

  • X – искомое число красных кровяных клеток в 1 мкл крови;
  • A обозначает количество сосчитанных клеток;
  • 200 – разбавление крови;
  • 80 – это количество малых посчитанных квадратов;
  • 1/4000 – объем маленького квадрата.

Внимание! Для достоверности результата расчет кровяных клеток при некоторых видах анемии необходимо проводить непосредственно после забора материала.

Возможные причины искажения результата

Как и любой другой лабораторный анализ, подсчет эритроцитов требует тщательной подготовки и аккуратности в исполнении. Искажение результатов анализа может возникнуть вследствие целого ряда причин. Оборудование хранят в сухом месте. Любая лабораторная работа, связанная с кровью, выполняется в резиновых перчатках.

Для начала следует убедиться в правильности подготовки и использования камеры. Перед работой и по ее окончании устройство необходимо тщательно промывать дистиллированной водой и насухо протирать мягкой тканью. Покровное стекло должно быть подготовлено заблаговременно таким же образом.

Возможные причины, влияющие на достоверность результата:

  • Некачественные реактивы, способные вызывать гемолиз.
  • Формирование сгустка крови в материале.
  • Неаккуратность в процессе забора крови в капилляр.
  • Плохо обработанные пробирки и пипетки.
  • Недобросовестная техника исполнения при работе с камерой и подсчете эритроцитов.
  • Высчитывание клеток сразу же после заполнения камеры (необходимо выждать 1 минуту, чтобы они успели осесть на поверхность).

В последнее время все большую популярность получает метод подсчета эритроцитов с использованием электронных счетчиков автоматического типа. Такая тенденция вполне обоснованна, так как автоматизированный процесс исследования значительно точнее и менее трудоёмок.

Принцип действия данного оборудования основан на разном показателе электропроводности клеток крови и раствора, в котором они помещены. Специальное электромагнитное устройство регистрирует изменение уровня сопротивления электрической цепи, когда эритроциты движутся через отверстие капилляра. Уже через несколько секунд на цифровом табло высвечивается результат с высчитанным числом клеток.

Повышенный показатель красных кровяных клеток в анализе называется полицитемией. Данное состояние возникает вследствие патологий, характеризующихся потерей жидкости в организме, например при диарейном синдроме.

Часто такое явление наблюдается на первых этапах инфекционных заболеваний, при отравлении токсичными веществами и прочем. Снижение же концентрации эритроцитов в крови известно как олигоцитемия.

И зачастую такая патология проявляется во время различного вида анемии.

Источник: http://LechiSerdce.ru/eritrotsityi/6054-podscheta-eritrotsitov-v-kameryi-goryaeva.html

Эритроциты в крови

Определение количества эритроцитов

Эритроциты (RBC) – это элементы кровеносной системы, представленные безъядерными двояковыпуклыми клетками. Имеют красный цвет за счёт входящего в их состав гемоглобина. Формируются данные клетки в мозговом веществе костей человека, а их разрушение происходит в печени и селезёнке. Составляют наибольшую долю из всех клеточных элементов крови.

Основные функции эритроцитов:

  • транспортная функция, которая заключается в транспортировке кислорода за счёт его присоединения к гемоглобину. Кроме этого, в составе эритроцита содержится фермент карбоангидраза, за счёт которой происходит присоединение и перенос углекислого газа из тканей человеческого организма к лёгким;
  • участие в поддержании кислотно-основного баланса организма;
  • перенос аминокислот из системы пищеварения к клеткам и тканям;
  • осуществление ферментативных процессов за счёт адсорбировавшихся (прикрепившихся) на их поверхности ферментов;
  • прикрепление к своей поверхности чужеродных токсинов и антигенов.

Показания для анализа

Диагностическим методом для определения числа эритроцитов в крови является общий анализ крови, который берётся методом прокола капилляров пальца или взятием венозной крови.

Его проведение показано каждому человеку, обратившемуся в лечебное учреждение.

Кроме определения концентрации эритроцитов, во многих случаях показано изучение их дополнительных характеристик: скорости оседания эритроцитов (СОЭ), среднего их объема, содержание гемоглобина в эритроцитах.

Основными показаниями для проведения данного анализа являются:

  • подозрение на анемию и определение её вида;
  • контроль за эффективностью проводимой терапии по поводу анемии;
  • предстоящее хирургическое вмешательство;
  • диагностика заболеваний кроветворной системы организма по показаниям или вследствие отягощенной наследственности у детей;
  • оценка состояния больного после проведения химиотерапии или лучевой терапии;
  • определение принадлежности пациента к какой-либо группе крови;
  • нахождение на территориальных зонах, которые представляют опасность по инфекционной патологии кровеносной системы.

Подготовка к проведению общего анализа крови

Перед сдачей общего анализа крови больному даются некоторые рекомендации, среди которых:

  • воздержание от употребления пищевых продуктов минимум за четыре часа до взятия крови – идеальным вариантом будет сдача анализа в утренние часы натощак;
  • избегание накануне чрезмерных физических или психоэмоциональных нагрузок.

В остальном дополнительных правил подготовки не устанавливается.

Нормы эритроцитов и их характеристик у взрослых и у детей

В общем анализе крови определяют число эритроцитов, которое обозначается как RBC. Кроме этого, анализируется показатель среднего объёма эритроцита (MCV) и среднее содержание гемоглобина в структуре эритроцита (MCH). Скорость оседания эритроцитов обозначается как СОЭ и измеряется в мм/час.

Уровень эритроцитов в норме:

Дети:

  • до 14 дней жизни – 3,9-5,9*1012/л;
  • до 1 месяца – 3,3-5,3*1012/л;
  • до 4 месяцев –3,5-5,1*1012/л;
  • до 6 месяцев – 3,9-5,50*1012/л;
  • до 9 месяцев – 4,0-5,3*1012/л;
  • до 1 года – 4,1-5,3*1012/л;
  • до 3 лет – 3,8-4,8*1012/л;
  • до 6 лет – 3,7-4,9*1012/л;
  • до 9 лет – 3,8-4,9*1012/л;
  • до 12 лет – 3,9-5,1*1012/л;

Взрослые:

  • мужчины – 4,3-5,7*1012/л,
  • женщины – 3,8-5,1*1012/л.

Нормальные показатели MCV (измеряются в фемтолитрах):

Дети:

  • до 14 дней – 88,0-140,0 фл;
  • до 1 месяца – 91,0-112,0 фл;
  • до 2 месяцев – 84,0-106,0 фл;
  • до 4 месяца – 76,0-97,0 фл;
  • до 6 месяцев – 68,0-85,0 фл;
  • до 9 месяцев – 70,0-85,0 фл;
  • до 1 года – 71,0-84,0 фл;
  • до 5 лет – 73,0-85,0 фл;
  • до 10 лет – 75,0-87,0 фл;
  • до 12 лет – 76,0-90,0 фл;

Взрослые:

  • женщины – 81,0-100,0 фл,
  • мужчины – 80,0-99,0 фл.

Нормы значения MCH (измеряется в пикограммах):

Дети:

  • до 14 дней – 30,0-37,0 пг;
  • до 1 месяца – 29,0-36,0 пг;
  • до 2 месяцев – 27,0-34,0 пг;
  • до 4 месяца – 25,0-32,0 пг;
  • до 6 месяцев – 24,0-30,0 пг;
  • до 9 месяцев – 25,0-30,0 пг;
  • до 1 года – 24,0-30,0 пг;
  • до 3 лет – 22,0-30,0 пг;
  • до 6 лет – 25,0-31,0 пг;
  • до 9 лет – 25,0-31,0 пг;
  • до 15 лет – 26,0-32,0 пг;

Взрослые:

  • женщины – 27,0-34,0 пг ,
  • мужчины – 27,0-34,0 пг.

Среднее значение СОЭ в норме составляет до 10 мм/час.

Причины отклонения от нормы

Факторы, которые могут повлечь за собой снижение количества эритроцитов:

  • формирование анемии в организме;
  • недостаточное поступление белка и витаминов с продуктами питания;
  • патологии со стороны кроветворной системы;
  • повышенная гибель клеточных элементов из-за воздействия токсических веществ.

Причины, вызывающие повышение уровня эритроцитов в крови:

  • снижение уровня жидкости в организме;
  • возникновение недостаточности со стороны дыхательной и сердечно-сосудистой систем;
  • патологические нарушения в системе кроветворения.

Основным мероприятием при обнаружении изменений числа эритроцитов является установление патологии, которая привела к этому. Для этого рекомендуется пройти комплексное обследование.

Источник: https://www.diagnos.ru/procedures/analysis/rbc

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.