Определение количества тромбоцитов

Содержание

5. Методика определения количество тромбоцитов. Диагностическая трактовка

Определение количества тромбоцитов

Существуютследующие методы определения количестватромбоцитов в единице объема крови:

1)методика Фонио;

2)подсчет в камере Бюркера с сеткойГоряева;

3)использование фазоконтрастной илюминисцентной микроскопии;

4)электронно-автоматический метод(счетчики «Культер», «Целлоскоп»).

Дляподсчета тромбоцитов периферическойкрови ча­ще всего применяют методикуФонио.

Оборудование иреактивы:

1)14% раствор магния сульфата.

Ходисследования: дляпредупреждения склеивания тромбоцитовпредварительно на место укола пальцанано­сят каплю 0,14 % раствора магниясульфата и через нее де­лают прокол.Выступившую каплю крови смешивают скаплей магния сульфата и делают мазок,который окра­шивают по Романовскому—Гимзе.

Затем в мазке под мик­роскопом симмерсионной системой одновременноподсчи­тывают 1000 эритроцитов инаходящиеся среди них тром­боциты.Последние встречаются в препарате либов оди­ночку, либо чаще разбросаныкучками междуэритроцита­ми. Повеличине тромбоцит занимает приблизительно1/3-1/4 эритроцита.

Тромбоциты не имеютядра и их ци­топлазма окрашена всиневатый цвет с красноватым от­тенкомв центре. Зная содержание эритроцитовв 1 л кро­ви, легко вычисляют абсолютноеколичество тромбоцитов.

Нормальноеколичество тромбоцитов в периферическойкрови: 180.0 – 320.0 х 109/л.(150-450 х 109/лсогласно рекомендациям ВОЗ).

Интерпретацияполученных данных.

Причиныувеличения числа тромбоцитов(тромбоцитоза).

  1. Миелопролиферативные заболевания – хронический миелолейкоз, эритремия, эссенциальная тромбоцитемия.

  2. Воспалительные процессы – острая ревматическая лихорадка, ревматоидный артрит и др.

  3. Злокачественные опухоли – лимфогранулематоз, рак.

  4. Острая кровопотеря и гемолитические анемии.

  5. Спленэктомия.

Причиныуменьшения количества тромбоцитов(тромбоцитопении).

  1. Врожденные (синдром Вискотта-Олдрича и др.) и приобретенные (идиопатическая иммунная тромбоцитопеническая пурпура, СКВ и др.), иммунодефициты.

  2. Апластическая, витамин-В12-фолиеводефицитная, тяжелая железодефицитная анемии.

  3. ДВС-синдром, гемангиомы.

  4. Вирусные инфекции, риккетсиозы, малярия.

  5. Гиперспленизм.

  6. «Синие» врожденные пороки сердца, застойная сердечная недостаточность.

  7. Лучевая болезнь.

  8. Лекарственные воздействия (цитостатики).

6. Методика сбора мокроты

Мокротойназывается патологический секрет,выделяемый с кашлем из дыхательныхпутей.

Мокрота собирается в чистуюширокогорлую стеклянную посуду сзакручивающейся крышкой в утренниечасы при кашле, после тщательногополоскания рта и горла, до приема пищи.

Собирать мокроту за сутки и большенецелесообразно, так как длительноестояние ведет к размножению флоры иаутолизу клеточных элементов. Принеобходимости мокроту сохраняют впрохладном месте (в холодильнике).

Источникомнаиболее ценной информации являетсясодержимое трахеобронхиального дерева,полученное при бронхоскопии (промывныеводы бронхов).

7. Исследование мокроты: макроскопическое, микроскопическое, бактериоскопическое. Понятие о бактериологическом методе исследования мокроты

Примакроскопическом изучении обращаютвнимание на: характер мокроты, количество,цвет, запах, консистенцию, слоистость,наличие различные включений.

Характер мокротыопределяется ее составом.

Слизистая– состоит из слизи (продукта слизистыхжелез дыхательных путей). Выделяетсяпри острых бронхитах, разрешении приступабронхиальной астмы.

Слизисто-гнойная– представляетсмесь слизи и гноя, причем слизьпреобладает, а гной включен в видекомочков или прожилок. Наблюдается прихронических бронхитах, бронхопневмонии.

Гнойно-слизистая– содержит слизь и гной (преобладаниегноя, слизь имеет вид тяжей). Характернадля хронических бронхитов, бронхоэктазии,абсцедирующей пневмонии.

Гнойная– не имеет примеси слизи и появляетсяв случае открытого в бронх абсцессалегкого, при прорыве эмпиемы плевры вбронх.

Слизисто-кровянистая– состоитиз слизи с прожилками крови или кровяногопигмента. Отмечается при катарах верхнихдыхательных путей, бронхогенном раке,пневмонии.

Слизисто-гнойно-кровянистая– содержит слизь, гной и кровь, чащеравномерно перемешанные между собой.Появляется при бронхоэктазах, туберкулезе,актиномикозе легких, бронхогенном раке.

Кровавоеотделяемое (кровохаркание) –встречается при туберкулезе, опухоляхбронхов и легкого, ранении легкого,актиномикозе.

Серозноеотделяемое– характерно для отека легких, представляетсобой пропотевшую в полость бронховплазму крови.

Количествомокроты (величинаотдельных порций и суточные количества)зависят от характера заболевания и отспособности больного к отхаркиванию.

Скудноеколичество мокроты – характерно длявоспаления дыхательных путей (трахеит,острый бронхит в начальной стадии,бронхиальная астма, бронхопневмония).

Обильноеколичество мокроты (от 0.5 до 2 л) выделяетсяобычно из полостей легочной ткани,бронхов (бронхоэктатическая болезнь,абсцесс легкого, прорыв эмпиемы), приповышенном кровенаполнении легких ипропотевании в легкие и бронхи большогоколичества плазмы крови (отек легких).

Цвети прозрачность мокротызависят от ее характера и от состававдыхаемых частиц.

Слизистаямокрота – стекловидная, прозрачная;слизисто-гнойная – стекловидная сжелтым оттенком; гнойно-слизистая –желто-зеленоватая; гнойная – желто-зеленая;слизисто-кровянистая – стекловиднаяс кровянистым или ржавым оттенком;слизисто-гнойно-кровянистая – стекловиднаяс желтыми комочками, прожилками красногоцвета или ржавыми оттенками; отделяемоепри легочном кровотечении – жидкое,красного цвета, пенистое; при распадеопухоли легкого может наблюдатьсямокрота в виде «малинового желе»;отделяемое при отеке легких – жидкое,прозрачно-желтое с опалесценцией,пенистое и клейкое.

Мокротас инородными примесями имеет цвет этихпримесей: белая у мукомолов, черная ушахтеров и др.

Запаху мокротыпоявляется при длительном стоянии, атакже при задержке мокроты в бронхахили полостях в легком и обусловлендеятельностью бактерий, вызывающихгнилостный распад белков.

Свежевыделеннаямокрота обычно не имеет запаха.

Мокротаимеет неприятный запах при бронхоэктатическойболезни, абсцессе легкого, туберкулезе,злокачественных новообразованиях снекрозом; зловонный (гнилостный) запахотмечается при гангрене легкого.

Консистенциятесно связанас характером мокроты и может быть вязкой,густой и жидкой. Вязкость зависит отсодержания слизи и от количестваформенных элементов – лейкоцитов,эпителия. Наиболее вязкая мокротаобнаруживается при муковисцидозе ибронхиальной астме.

Слоистостьмокроты. Прибронхоэктазах, гнилостном бронхите,абсцессе и гангрене легкого мокротапри стоянии разделяется на три слоя: надне посуды находятся тяжелые элементымокроты – гной и детрит, образующийсявследствие распада легочной ткани;средний слой составляет серознаяжидкость; в верхнем – плавающие частицы,содержащие воздух и слизь.

Включения,патологические элементы,паразиты в мокроте обнаруживают путемее рассмотрения в чашке Петри на беломили черном фоне, используя лупу.

Вмокроте можно выявить:

1)спирали Куршмана – штопорообразноизвитые трубчатые тела, имеющиедиагностическое значение при бронхиальнойастме;

2)фибринозные свертки – древовидноразветвленные образования эластичнойконсистенции, имеющие значение прифибринозном бронхите, реже – при крупознойпневмонии;

3)рисовидные тельца (линзы Коха) – плотные образования творожистой консистенции,состоящие из детрита, туберкулезныхпалочек и эластических волокон;обнаруживаются при кавернозномтуберкулезе легких;

4)гнойные пробки Дитриха – состоят издетрита, бактерий, кристаллов жирныхкислот, встречаются при гангрене легкого;

5)дифтеритические пленки;

6)некротизированные кусочки легкого;

7)частицы опухоли легкого;

8)друзы актиномицетов;

9)элементы эхинококка;

10)случайно попавшие из полости инородныетела (семена подсолнечника и др.).

Микроскопическоеисследование мокроты.

Микроскопическоеисследование мокроты проводят в свежихнеокрашенных и фиксированных окрашенныхпрепаратах.

Элементымокроты, которые обнаруживаются внативном препарате, можно разделить натри основные группы.

  1. Клеточные элементы – плоский эпителий (одиночные клетки встречаются всегда, множественные – при воспалительных явлениях в ротовой полости); цилиндрический эпителий (встречается при остром катаре верхних дыхательных путей, остром бронхите, бронхиальной астме); макрофаги «жировые шары» (встречаются при раке легкого, туберкулезе, актиномикозе), сидерофаги – «клетки сердечных пороков», макрофаги с гемосидерином (обнаруживают при застое в малом круге кровообращения, при инфаркте легкого), кониофаги – пылевые макрофаги (характерны для пневмокониозов и пылевых бронхитов); опухолевые клетки; лейкоциты (в слизистой мокроте – единичные, в гнойной – покрывают все поля зрения); эритроциты (единичные могут быть в любой мокроте, окрашенной кровью).

  2. Волокнистые образования – эластические волокна, которые указывают на распад легочной ткани при туберкулезе, абсцессе, опухоли, коралловые волокна (отложение на эластичном волокне жирных кислот и мыл) и обызвествленные волокна (пропитанные солями извести); фибринозные волокна (при фибринозном бронхите, крупозной пневмонии, иногда при актиномикозе); спирали Куршмана.

  3. Кристаллические образования – кристаллы Шарко-Лейдена (продукт кристаллизации белков распавшихся эозинофилов, встречается при бронхиальной астме, глистных поражений легких), кристаллы гематоидина (обнаруживаются при кровоизлияниях в легочную ткань, в некротизированной ткани), кристаллы холестерина (встречаются при задержке мокроты в полостях – туберкулез, абсцесс, эхинококкоз); кристаллы жирных кислот – также образуются при застое мокроты в полостях легкого.

Окраскупрепаратов производят с целью изученияклеток крови в мокроте и длябактериологического исследования.

Дляизучения клеток крови в мокроте применяютспособ окрашивания по Романовскому-Гимзе.При этом способе окраски удаетсядифференцировать клетки лейкоцитарногоряда, эритроциты, однако, наибольшеезначение имеет выделение эозинофилов(эозинофилия мокроты свойственна длябронхиальной астмы, глистного поражениялегких, эозинофильной пневмонии).

Бактериоскопическоеисследование мокроты с окраской поГрамму имеет ориентировочное значениедля выявления грамм-положительной играмм- отрицательной микрофлоры. Окраскапо Цилю-Нильсену производится с цельюобнаружения микобактерий туберкулеза.

Вслучае, когда при бактериоскопии из-замалого количества микобактерийтуберкулеза обнаружить из не удается,прибегают к ряду дополнительныхисследований (люминесцентная микроскопия,методы накопления бактерий – флотацияи электрофорез).

Иногдав окрашенном препарате можно выявитьразличные виды грибов – аспергиллы,кандиды, актиномицеты.

Бактериологическоеисследование мокроты.

Бактериологическийметод позволяет выделить возбудителязаболевания в чистом виде при посевемокроты на питательные среды, определитьвирулентность и лекарственную устойчивость(чувствительность) выделенногомикроорганизма, что необходимо длярационального подбора антибактериальныхсредств. В некоторых случаях производятзаражение экспериментальных животныхмокротой, полученной от больногочеловека.

Источник: https://StudFiles.net/preview/5242679/page:5/

Тромбоциты (thrombocytus)

Определение количества тромбоцитов

Норма: 180–320×109/л (200–400×109/л)
Тромбоциты (кровяные пластинки) — это безъядерные клетки диаметром 2–4 мкм, являющиеся «осколками» цитоплазмы мегакариоцитов костного мозга.

В крови здорового человека при световой микроскопии (окраска
по методу Романовского — Гимза) различают четыре основные формы тромбоцитов:

1. Нормальные (зрелые) тромбоциты (87,0 ± 0,13 %) — круглой или овальной формы диаметром 3–4 мкм; в них видна бледно-голубая наружная зона (гиаломер) и центральная (грануломер) с азурофильной зернистостью.

2. Юные (незрелые) тромбоциты (3,20 ± 0,13 %), несколько больших размеров с базофильной цитоплазмой, азурофильная грануляция (мелкая и средняя) располагается чаще в центре.

3. Старые тромбоциты (4,10 ± 0,21 %) могут быть круглой, овальной, зубчатой формы с узким ободком тем ной «цитоплазмы», с обильной грубой грануляцией, иногда наблюдаются вакуоли.

4. Формы раздражения (2,50 ± 0,1 %) больших размеров, вытянутые, колбасовидные, хвостатые, «цитоплазма» в них голубая или розовая, азурофильная зернистость рассеяна или разбросана неравномерно.

Гиаломер тромбоцитов (основа пластинки) ограничен трехслойной мембраной, которая, по-видимому, идентична мембране других клеток кроветворной ткани. Мембрана клетки инвагинирует и соединяется с сетью многочисленных каналов (так называемая открытая канальцевая система — ОКС), которые тесно переплетены внутри тромбоцита.

Наружная клеточная оболочка и ОКС усеяны гликопротеинами, играющими важную роль в адгезии и агрегации тромбоцитов.

В цитоплазме тромбоцитов можно обнаружить 4 вида гранул различной структуры, формы и величины, равномерно распределенные в кровяной пластинке или чаще собранные в ее центре (грануломер).

Наиболее многочисленные α-гранулы содержат тромбоцитоспецифические и тромбоцитонеспецифические пептиды, участвующие в механизмах коагуляции, воспаления, иммунитета и репарации.

Плотные гранулы представляют собой богатое хранилище АДФ и серотонина — веществ, способствующих агрегации тромбоцитов; а также антиагреганта АТФ и основного кофактора коагуляции Са2+. Лизосомальные гранулы содержат гидролитические ферменты, а пероксисомы — каталазу.

  • Запуск немедленного гемостаза за счет адгезии и агрегации тромбоцитов, что приводит к формированию тромбоцитарной пробки;
  • местное выделение вазоконстрикторов для уменьшения кровотока в пораженном участке;
  • катализ реакций гуморальной системы свертывания с образованием в конечном счете фибринового сгустка;
  • инициирование репарации ткани;
  • регулирование местной воспалительной реакции и иммунитета.

Нестимулированные тромбоциты циркулируют в виде гладких дискоидных клеток с незначительной метаболической активностью. Такие тромбоциты не вступают в физиологически значимое взаимодействие с другими форменными элементами крови или монослоем эндотелиальных клеток.

Физиологическая активация тромбоцитов начинается только тогда, когда поврежден сосудистый эндотелий и обнажен субэндотелиальный внеклеточный матрикс. В тромбоцитарной мембране возникают волны возбуждения и формируется большое количество коротких нитевидных псевдоподий или филоподий.

В результате этого процесса значительно увеличивается площадь поверхности мембраны, что необходимо для катализа реакций гуморальной системы.

С инициированием активации тромбоцитов внутриклеточные органеллы сосредотачиваются в центре клетки, после чего происходит слияние мембран плотных и α-гранул друг с другом, с клеточной мембраной и с мембранами ОКС. Это приводит к экзоцитозу содержимого гранул в наружную микросреду.

Происходящий в это время каскад аутоактивации тромбоцитов, синтез ромбоксана и выделение содержимого гранул приводят к появлению тромбоцитарного агрегата, прошитого фибриногеновыми мостиками с участием гликопротеина мембранных рецепторов соседних тромбоцитов.

Известно, что мегакариоциты синтезируют и депонируют в α-гранулах факторы свертывания V, VIII, XIII и фибриноген, которые выбрасываются в микросреду при активации тромбоцитов. Тромбоцитарные мембраны играют не менее важную роль в запуске специфических реакций свертывания.

Наиболее распространенный метод подсчета тромбоцитов — метод Фонио (готовят мазок и красят его по Романовскому — Гимза; считают количество тромбоцитов, встретившихся при подсчете 1000 эритроцитов).

Подсчета тромбоцитов в камере Горяева

Существует также метод подсчета тромбоцитов в камере Горяева: кровь разводят 1% раствором оксалата аммония, или раствором, приготовленным по сложной прописи (см. ниже), или 5–7% раствором трилона Б (для предотвращения свертывания крови и агглютинации кровяных пластинок), заполняют камеру и подсчитывают тромбоциты по обычному правилу.

Метод люминесцентной микроскопии

Меньшее распространение получили методы определения количества тромбоцитов с помощью люминесцентной микроскопии.

Метод подсчета с использованием электронно-автоматических счетчиков

В настоящее время наиболее перспективен метод подсчета с использованием электронно-автоматических счетчиков в разведенной пробе после лизиса эритроцитов (для подтверждения данных лабораторного анализа необходимо исследовать мазок периферической крови).

  • Капилляром Панченкова набирают 14% раствор сернокислого магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в количестве 25 мкл (до метки «75») и вносят в пробирку;
  • кровь из пальца набирают полный капилляр (до метки «0») и выливают всю кровь в пробирку;
  • содержимое пробирки тщательно перемешивают и из смеси готовят мазок, который фиксируют и окрашивают по Романовскому — Гимза. Если в качестве стабилизатора был взят раствор сернокислого магния, то продолжительность окраски составляет 2–3 часа, а при использовании раствора ЭДТА — 30–45 минут;
  • наносят на край мазка — в тонкой его части — иммерсионное масло;
  • считают количество тромбоцитов, встретившихся при подсчете 1000 эритроцитов; при подсчете, чтобы не сбиться, рекомендуется прибегать к ограничению поля зрения путем применения окуляров, поле зрения которых разделено сеткой.

Зная количество эритроцитов в 1 мкл крови и число тромбоцитов на 1000 эритроцитов, вычисляют количество тромбоцитов в 1 мкл крови.

где Э — число эритроцитов в 1 мкл.

Количественное определение тромбоцитов в камере Горяева

  • В пробирку наливают 4 мл раствора, приготовленного по сложной прописи (3 г кокаина солянокислого, 0,25 г хлористого натрия, 0,025 г фурацилина, 100 мл дистиллированной воды)* или 4 мл 1% раствора оксалата аммония;

* На практике в клинических лабораториях, ввиду принадлежности кокаина к наркотическим веществам, используют пропись следующего состава: новокаина гидрохлорида 3,5 г; натрия хлорида 0,25 г; воды дистиллированной до 100 мл. Время гемолиза эритроцитов составляет около 60 мин.

  • капиллярной пипеткой набирают 20 мкл крови, осторожно выдувают ее в пробирку с реактивом и ополаскивают пипетку. Смесь хорошо перемешивают и оставляют на 25–30 минут для гемолиза эритроцитов;
  • после повторного перемешивания заполняют камеру Горяева, которую помещают во влажную камеру;
  • через 5 минут производят подсчет количества тромбоцитов в 25 больших квадратах с использованием фазово-контрастного устройства.

Формула для подсчета тромбоцитов:

где а — количество тромбоцитов в 400 малых квадратах;
П — степень разведения (200).

Норма: 180–320 × 109/л (200–400 × 109/л)

Увеличением количества тромбоцитов характеризуются:

  • миелопролиферативные процессы (эритремия, миелофиброз);
  • хронические воспалительные заболевания (ревматоидное поражение суставов, язвенный колит, туберкулез, остеомие лит, цирроз печени);
  • злокачественные новообразования (рак, лимфома, лим фо гра нуле матоз);
  • кровотечения, гемолитическая анемия;
  • период выздоровления при мегалобластных анемиях;
  • после операций;
  • состояние после спленэктомии;
  • лечение кортикостероидами.

Уменьшением количества тромбоцитов (тромбоцитопенией) характеризуются:

  • наследственные тромбоцитопении, вызванные снижением образованиятромбоцитов(врожденнаятромбоцитопения, синдром Уискотта—Олдрича, синдром Бернара — Сулье, аномалия Чедиака — Хигаси, синдром Фанкони, краснуха новорожденных, гистиоцитоз);
  • болезни крови (апластическая анемия, мегалобластные анемии, лейкозы);
  • поражение костного мозга (метастазы новообразований, туберкулезное поражение, ионизирующее облучение);
  • другие заболевания (циклическая тромбоцитопения, пароксизмальная ночная гемоглобинурия, гемолитико-уремический синдром, почечная недостаточность, заболевания печени, опухоли сосудов, селезенки, эклампсия, гипертиреоз, гипотиреоз);
  • инфекции (вирусные, бактериальные, риккетсиозы, маля рия, токсоплазмоз, ВИЧ-инфекция);
  • беременность, менструации;
  • действие лекарственных препаратов (цитостатиков, анальгетиков, антигистаминных средств, антибиотиков, психотропных лекарств, диуретиков, противосудорожных средств, витамина К, резерпина, дигоксина, гепарина, нитроглицерина, преднизолона, эстрогенов и др.);
  • действие алкоголя, тяжелых металлов;
  • тромбоцитопении, вызванные повышенным потреблени ем тромбоцитов (тромбоцитопеническая пурпура, гиперспленизм, ДВС-синдром, кровотечения, гемодиализ).

Кровяные пластинки обладают групповой специфичностью, соответствующей групповой специфичности эритроцитов. Это должно учитываться при переливании тромбоцитарной массы.

Жив ли Христос? Воскрес ли Христос из мертвых? Исследователи изучают факты

Источник: http://dyagnoz.ru/trombocity-thrombocytus

Нормы тромбоцитов, анализ по методу Фонио, способы нормализации

Определение количества тромбоцитов

Общий анализ крови включает исследование количественного состава клеток крови: эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.

Состав крови

В лабораториях используют автоматические гематологические счетчики, но методы микроскопического анализа остаются наиболее информативными и точными. Один из таких методов – микроскопия мазка по Фонио для подсчета количества тромбоцитов.

Микроскопию мазка используют в тех случаях, когда результаты исследований автоматического подсчета гемоанализаторами значительно отклоняются от нормы.

Тромбоциты по Фонио подсчитываются по формуле, привязанной к значению абсолютного количества эритроцитов в крови.

Поэтому методика является частью общего исследования крови и выполняется после автоматического подсчета количества других клеток крови (эритроцитов).

Тромбоциты

Тромбоциты – безъядерные клетки, образуемые из мегакариоцитов костного мозга. После созревания и попадания в кровь клетка живет 5-7 суток. Старые клетки утилизируются печенью и селезенкой. Процесс старения у этих клеток особо выражен.

Тромбоциты, как и другие клетки крови, делятся на юные, зрелые и старые. В норме в крови содержится не менее 95% зрелых клеток. Выброс в кровь незрелых клеток может быть вызван фактором раздражения (множественные повреждения сосудов). В крови могут быть обнаружены и дегенеративные, старые клетки, что свидетельствует о патологии процесса созревания и утилизации.

Тромбоциты – главные участники процессов тромбообразования. Вместе с тем, выделяя особые ферменты, они стимулируют деление клеток и регенерацию тканей, регулируют уровень проницаемости мембран клеток, поддерживают эластичность стенок сосудов.

По их количеству можно определить состояние здоровья сердечно-сосудистой системы. Повышенное количество называют тромбоцитозом, пониженное – тромбоцитопенией.

Функции клеток

Тромбоциты хорошо окрашиваются красителями. В зависимости от степени зрелости клетки окрашиваются с разной интенсивностью, что упрощает дифференциальную диагностику их морфологического состава.

Метод подсчета тромбоцитов по Фонио

Клетки подсчитывают разными способами. Камера Горяева и метод Фонио принципиально похожи и являются самыми распространенными. Суть метода Фонио заключается в параллельном подсчете окрашенных клеток эритроцитов и тромбоцитов в полях сетки микроскопа. В камере Горяева эта сетка нанесена лазером на само стекло.

Подсчет тромбоцитов по Фонио выполняют с использованием недорогих реактивов:

  • В качестве коагулянта применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА);
  • Для фиксации мазка используют раствор Лейшмана (раствор эозин-метиленовой синьки в метаноле).
  • Эозиновый краситель Гимзы для окраски по Романовскому.

Метод подсчета тромбоцитов по методу Фонио популярен не только из-за простоты и низкой себестоимости. В отличие от подсчета тромбоцитов в камере Горяева микроскопию мазка по Фонио можно выполнить через несколько часов или дней после сдачи анализа. Лабораториям, заваленным текущими заявками, это позволяет снизить пиковые нагрузки, связанные с утренними наплывами пациентов.

Кроме того, возможность повторной микроскопии через несколько дней позволит сравнить показания или уточнить результат подсчета.

Выполнение анализа

Для анализа используется капиллярная кровь (из пучки пальца).

После прокола пучки первая капля не используется, ее удаляют ваткой. Для мазка берут вторую каплю. Обычно коагулянт добавляют в выступившую каплю крови и сразу помещают образец на стекло. Но лаборант может смешивать кровь с коагулянтом в пробирке.

Мазки фиксируются и окрашиваются методом Паппенгейма. При нанесении на приготовленный мазок крови нескольких капель раствора фиксатора клетки приклеиваются к стеклу. Гематологические фиксаторы способны прокрашивать клетки, что ускоряет процесс подготовки мазка.

Затем на мазок наносят несколько капель краски Гимзы-Романовского и выдерживают 2-3 ч. (с использованием магнезии) или 30-45 мин. (с использованием в качестве коагулянта ЭТА). В результате клетки крови окрашиваются и хорошо просматриваются для ручного подсчета.

После промывания мазок высушивают в сушильном шкафу и приступают к исследованию при помощи микроскопа, оснащенного иммерсионным объективом и сегментированными окулярами.

Подсчет тромбоцитов

Сетка, нанесенная на окуляры, облегчает подсчет тромбоцитов в мазке крови. Лаборант считает число клеточных элементов по секторам этой сетки.

Мазок под микроскопом

Параллельный подсчет количества эритроцитов и тромбоцитов начинают с одного сектора, и, передвигая окуляр, переходят к следующему сектору. Подсчет заканчивают, когда число эритроцитов достигнет 1000.

Важно! Погрешность метода обусловлена тем, что при подсчете учитывают только скопления этих клеток. Отдельно расположенные одиночные клетки не учитывают.

После того как получено число тромбоцитов, привязанное к 1000 клеток эритроцитов, приступают к вычислению абсолютного количества клеток в единице объема крови. Для этого понадобится значение абсолютного количества эритроцитов крови данного пациента, полученное в автоматическом анализаторе.

Расчет выполняют по такой формуле: значение абсолютного количества эритроцитов делят на 1000 и умножают на число подсчитанных при микроскопии тромбоцитов:

где T – число подсчитанных тромбоцитов, E – абсолютное число эритроцитов.

Достоверность результатов

Низкое качество оборудования и нечеткое следование методике исследования может повлиять на достоверность результата. Причины получения искаженных данных:

  • Использование некачественных химикатов;
  • Неправильная подготовка растворов;
  • Несоблюдение сроков окрашивания;
  • Неправильный режим сушильной камеры.

В условиях массового выполнения микроскопии особое значение имеет правильная организация работы, маркировка и хранение образцов.

Получение объективных результатов зависит не только от правильного выполнения всех требований методики лаборантом, но и от самого пациента. Он должен ответственно подойти к процедуре обследования и подготовиться к сдаче анализа:

  • Забор крови выполняют на голодный желудок, поэтому пациент должен отказаться от приема пищи за 8 часов до визита в лабораторию.
  • Если образ жизни пациента или условия его работы связаны с постоянными физическими нагрузками, рекомендуется за 2 дня до анализа их ограничить.
  • Любители алкоголя должны помнить, что прием этилового спирта провоцирует многократный подъем тромбоцитов.
  • Эмоциональные стрессы тоже негативно сказываются на картине крови, поэтому несколько дней в преддверии сдачи анализов нужно провести в спокойной обстановке.

Описания некоторых лекарств (гепарин, простагландин, аденозин) содержат информацию о том, что препарат временно может влиять на состав крови. Пациент обязательно должен поставить врача в известность о любых принимаемых препаратах. Врач оценит вероятность искажения результатов анализа и примет взвешенное решение о временной отмене этого средства.

Расшифровка результатов, причины отклонений

В стандартном лабораторном бланке тромбоциты обозначаются PLT. Единица, в которой представлены результаты, – тысячи единиц на микролитр. Обычно в лабораторных бланках для сравнения указана и норма.

Таблица нормального состава крови

Норма содержания в крови тромбоцитов для мужчин отличается от нормы для женщин. Она зависит и от возраста человека.

  • Норма для мужчин – 200–400 тыс./микролитр;
  • Для женщин – от 180 до 320 тыс./ микролитр.

Норма для детей:

  • У новорожденных до 2 недель – от 100 до 420 тыс./ микролитр;
  • У малышей до года – от 150 до 350 тыс./ микролитр;
  • У детей до 5 лет – 180-380 тыс./ микролитр;
  • У детей до 7 лет – от 180 до 150 тыс./ микролитр.

В период менструации отмечается нормальное (физиологическое) понижение клеток (75-200 тыс./мкл). Двукратное сокращение количества тромбоцитов связано с необходимостью отторжения эпителия матки. Снижение тромбоцитов у беременных (100-300 тыс./мкл) тоже считается нормальным.

Во время менструации сдавать анализ на тромбоциты не рекомендуется.

Высокие тромбоциты

Тромбоцитоз, вызванный патологией стволовых клеток в костном мозге, называют первичным.

Физиологическое повышение тромбоцитов как реакцию организма на травму, употребление алкоголя, инфекцию или отравление называют вторичной. Механизм такой реакции связан с усиленным выбросом тромбопоэтина, который стимулирует деление и рост тромбоцитов в костном мозге.

Тромбоцитоз может возникнуть в результате таких заболеваний:

  • Туберкулез;
  • Миелолейкоз;
  • Анемия;
  • Артрит;
  • Эритроцитоз;
  • Лимфогранулематоз;
  • Острые инфекции;
  • Рак печени, почек.

Отравление, стресс и интенсивная физическая нагрузка способны вызвать увеличение количества тромбоцитов.

Важно! При обильных кровопотерях на фоне уменьшения объема крови уровень тромбоцитов снижается только в первые часы, а через несколько часов уровень может повыситься в несколько раз.

Низкие тромбоциты

Причиной тромбоцитопении зачастую становится бесконтрольное самолечение препаратами, побочным эффектом которых и становится развитие тромбоцитопении.

Причиной тромбоцитопении могут быть такие заболевания:

  • Болезни печени (гепатит, цирроз);
  • Нарушение функции щитовидной железы (гипертиреоз, гипотиреоз);
  • Отдельные виды лейкоза;
  • Мегалобластная анемия;
  • Алкоголизм.

При затяжной тромбоцитопении стенки сосудов становятся хрупкими, незначительные порезы и повреждения сосудов приводят к длительному кровотечению.

Для уточнения причины низких тромбоцитов и назначения терапии пациенту придется пройти множество дополнительных обследований (УЗИ печени, селезенки, тест на антитела, МРТ). Анализ крови на число тромбоцитов по Фонио нужно будет сдавать регулярно.

Как нормализовать показатели тромбоцитов

Когда тромбоциты понижены, врач назначает медикаментозную терапию. Но пациент может сделать процесс лечения эффективнее:

  • Снизить потребление соли, алкоголя, исключить из рациона морскую капусту, красные сорта винограда;
  • Включить в ежедневный рацион рыбу, печень, гречку, орехи, яблоки, сельдерей, сладкий перец.
  • Не принимать лекарства, которые вызывают тромбоцитопению (антибиотики, антидепрессанты).
  • Принимать синтетические витаминные комплексы, включающие витамины группы А, В, С.

При высоких показателях снизить уровень тромбоцитов можно при помощи нормализации образа жизни, уменьшения стрессов, травм. Из медикаментов снизить тромбоциты поможет ацетилсалициловая кислота. Дозы препарата назначает только врач.

Нужно внести коррективы в свой рацион:

  • Исключить шиповник, гранат, бананы, манго;
  • Употреблять продукты, содержащие ацетилсалициловую, яблочную или лимонную кислоту и разжижающие кровь (клюква, свекла, облепиха, томаты, зеленый чай);
  • Контролировать объем употребляемой жидкости, так как обезвоживание приводит к повышению вязкости крови.

Эти меры помогают нормализовать уровень тромбоцитов, нарушения которого носят вторичный (реактивный) характер. Первичные тромбоцитопении и тромбоцитозы подлежат длительной диагностике и терапии.

Источник: http://LechiSerdce.ru/analiz-krovi/6130-trombotsitov-po-fonio.html

Подсчет тромбоцитов в мазке крови

Определение количества тромбоцитов
       admin       страница » Анализы       3893 (1 5,00 из 5)
Загрузка…

Тромбоциты – это дискообразные пластинки, не имеющие ядра, которые находятся в крови человека и вырабатываются клетками костного мозга, а также участвуют в процессе остановки кровотечения.

Уменьшение или увеличение числа клеток является опасным для организма человека, поэтому огромное значение имеет определение количества тромбоцитов.

Методики определения числа клеток

Применяются разные методики подсчета тромбоцитов. Сейчас подсчитывание в мазке крови ведется несколькими способами:

  • Подсчитывание по методике Фонио;
  • Вычисление количества тромбоцитов камерой с использованием методики Горяева;
  • Подсчитывание с помощью автоматических электронных счетчиков;
  • С использованием люминесцентного микроскопа.

Болезнь, при которой увеличивается количество клеток, называется тромбоцитоз. При снижении – в крови возникает тромбоцитопения.

Норма у здорового человека:

У взрослых мужчин и женщин180-320*109/л
У беременных150-380*109/л
У детей от 0 до 12 месяцев100-420*109/л
У старших детей180-320*109/л

Подсчитывание числа тромбоцитов по Фонио

Исследование по методике Фонио применяется наиболее часто. Оно базируется на определении количества пластинок в окрашенных мазках крови с использованием химреактивов:

  • сульфат магния 14%;
  • этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) натрия 6%.

Подсчет тромбоцитов в мазке крови

Ход исследования

Сульфат магния или ЭДТА при помощи капилляра Панченкова помещают в стеклянную пробирку, туда же помещают капиллярную кровь, которую берут, используя тот же капилляр.

Кровь с реактивом перемешивают, а затем из полученного раствора готовят материал для определения.

Для этого на предметное стекло наносятся тонкие мазки, они фиксируются и окрашиваются:

  • с применением магния сульфата – 2-3 часа;
  • с использованием ЭДТА – 30-45 минут.

После высыхания мазки разглядывают под микроскопом, у которого имеется иммерсионный объектив для увеличения изображения и усиления яркости.

Кровяные пластинки должны располагаться по отдельности, чтобы этого добиться используется самое тонкое место мазка.

Как считать тромбоциты в мазке крови?

Для подсчета мазок передвигается под объективом микроскопа, чтобы были подсчитаны 1000 эритроцитов. Затем считают находящиеся среди них кровяные пластинки.

При известном количестве эритроцитов в одном литре крови, можно произвести подсчет абсолютного числа тромбоцитов.

Определение количества при помощи камеры Горяева

По методу Горяева тромбоцитарные пластинки считает камера с применением цитратного вещества. Число клеток определяют в 1 МК/л или в литре крови.

Для этого используют следующие химреактивы:

Химреактив №1:

  • гидрохлорид кокаина 3 г;
  • хлорид натрия 0,25 г;
  • фурацилин 0,25 г;
  • вода 100 мл.

Химреактив №2:

  • 1% раствор оксалата аммония. Раствор надо прокипятить, профильтровать и после этого он хранится на холоде. При помощи этого реактива растворение эритроцитов происходит быстрее.

Подсчитывание с помощью счетчиков

Счетчик называется автоматический гематологический аппарат. С его помощью можно определить количество кровяных пластинок, также сделать гистограмму (распространение по величине).

Аппаратное исследование достаточно точное, делается экспресс-методом, который выдает результаты в течение 1 минуты.

Более дешевые модели счетчиков только определяют число, а усовершенствованные приборы делают качественный обзор целого комплекса клеток, куда входит:

При помощи аппаратного гематологического счетчика можно также построить график расположения клеток по размеру.

Методика люминесцентной микроскопии с помощи лампы считается устаревшим. Для определения тромбоцитов получил меньшее распространение и сейчас почти не используется.

Для обзора и подсчитывания клеток крови используют различные методы микроскопического исследования, а также гематологические электронные счетчики.

Внедрение новых технологий для изучения состава клеток позволит исключить ошибки лаборантов и добиться более высокой точности и качества диагностики.

Источник: http://trombanet.ru/podschet-trombocitov-v-mazke-krovi/

Ручной подсчет тромбоцитов

Определение количества тромбоцитов
Тромбоциты – уникальные безъядерные клетки, которые не только принимают активное участие в регенерации клеточных структур, а также препятствуют развитию обильного кровотечения, но и регулируют процессы проницаемости клеточных мембран.

Их количество в крови может свидетельствовать о состоянии здоровья, а отклонения от нормы – первая причина развития патологических процессов сердечно-сосудистой системы. Данные клетки синтезируются из плазмы мегакариоцитов – крупных клеток костного мозга.

Продолжительность жизни не велика – всего 5-7 дней, после чего они утилизируются селезенкой и частично печенью. Тромбоцитам свойственно старение, от которого зависит качественный состав крови.

Чтобы определить уровень содержания тромбоцитов в крови, используют лабораторный анализ Фонио, при котором исчисление производится наиболее точно. Особенности этого метода и способы вычислений разберем далее.

Такой способ лабораторного исследования предполагает забор крови из пальца, после чего ее смешивают с реактивами и рассматривают мазок под микроскопом.

Определение числа тромбоцитов исчисляется по формуле, в эквиваленте отношения к эритроцитам, как наиболее тяжелым и объемным кровяным клеткам. То есть, каждый мазок рассматривают в перерасчете на 1000 эритроцитов.

Такое соотношение позволяет более точно выявить наличие патологий синтеза тромбоцитарных клеток, а также снижает риски выявления псевдобтромбоцитоза.

Если рассматривать это соотношение более подробно, то вначале исчисляется общее количество эритроцитов в мазке, после чего показатель умножается на мл или мкл крови. Полученную величину сопоставляют с количественным составом тромбоцитов.

Суть метода основывается на взаимозависимости фракций крови. Иными словами, при повышенном содержании тромбоцитов, эритроцитов также будет больше. Прямая пропорциональность позволяет определять не только тромбоцитарный уровень в мазке крови, но и пересчитывать его на литры и микролитры.

Это удобно, поскольку нет необходимости брать много крови и обследовать ее всю, на что уйдет масса времени, сил лаборанта, а также реактивов, от чего стоимость анализа будет значительно выше, нежели имеется сейчас.

Последовательность проведения анализа

Для анализа тромбоцитарного уровня по Фонио обычно имеются показания, поэтому пациента заблаговременно подготавливают к забору крови. Предлагается отказаться от лекарственных препаратов, алкоголя, жирной и сладкой пищи, а также газированных напитков за 24 часа до проведения исследования.

Для анализа потребуются следующие реактивы:

  • раствор сульфата магния – выступает в качестве коагулянта;
  • краситель Романовского-Гимзы – возволяет разглядеть тромбоциты в общей массе крови, цвет которых измениться под воздействием красителя.

Кровь на анализ берут из безымянного пальца, который хорошо дезинфицируют спиртом или муравьиной кислотой.

После этого производится прокол скарификатором пучки. Первую появившуюся кровь снимают сухой ватой, поскольку она не пригодна для анализа.

В появившуюся на поверхности пальца вторую каплю, вводят специальный раствор сульфата магния, после чего производят забор образованной субстанции специальным стеклянным периходником в пробирку.

Палец пациента обрабатывается спиртом, дабы избежать инфицирования.

Из полученных образцов готовят мазки, нанося небольшое количество крови на предметное стекло, а также внося краситель, который поможет при подсчете фракций. Продолжительность окраски составляет от 35 минут до 2 часов, в зависимости от качества реактивов.

Ход определения

Зрительно определить тромбоциты несложно. В зависимости от возраста, клетки могут окраситься в фиолетовый или розовый оттенок. Их границы четки, а в центре отмечается наличие специфических гранул. Форма округлая вытянутая, иногда с наличием ровных овалов.

На определенном фиксированном участке считают количество эритроцитов, а также, сколько на них приходиться тромбоцитов. Такая процедура производится до тех пор, пока не будет подсчитано ровно 1000 эритроцитов. Во внимание берут только близлежащие клетки, которые образуют группы. Единичные включения не несут никакой ценности и не составят биологической нагрузки при исследовании.

Предметное стекло перемещают под микроскопом до тех пор, пока не получиться нужная отметка. Для этого меняются поля зрения, что доступно современной технике. В некоторых клиниках данный подсчет производиться автоматически. Специальные микроскопы способны самостоятельно распознавать различные фракции крови, а также определять их соотношение в общей массе.

Получив необходимые показатели, уровень тромбоцитов рассчитывают по формуле:

  • х – искомый уровень тромбоцитов;
  • а – количество тромбоцитов в мазке на 1000 эритроцитов;
  • b – количество эритроцитов в 1 л крови;
  • 1000 – показатель содержания эритроцитов в мазке.

Расчет количества тромбоцитов

Чтобы было понятнее, как производиться расчет, разберем на примере.

В ходе лабораторного исчисления было установлено, что количество тромбоцитов (указывается в промилле, поскольку величина относительная количеству эритроцитов) 75.

На 1 мкл количество эритроцитов составляет 5х10, из чего следует, что количество тромбоцитов: 753,5х10/1000. В итоге получается, что в 1 мкл крови содержится 262х10, что считается нормой.

Особенности и преимущества метода исследования

Лабораторное определение и подсчет тромбоцитов по Фонио имеет несколько преимуществ:

  1. Точность анализа – достигается за счет использования формулы расчета, компоненты которых легко можно подсчитать в капле крови.
  2. Быстрота проведения – от момента забора крови до получения результата может понадобиться не более 2 часов, а с использованием высокоточного оборудования процедура займет всегоминут.
  3. Не требуется дорогостоящих реактивов – достаточно ввести коагулянт, чтобы спровоцировать активность тромбоцитов, а также подкрасить мазок крови специальным раствором, который улучшит процесс распознания безъядерных клеток.

особенность исследования заключается в получении наиболее точных результатов, нежели при развернутом анализе крови (коагулограмма).

Что влияет на качество анализа?

Выделяют 3 основополагающих фактора, которые могут значительным образом повлиять на качество и результат анализа определения количества тромбоцитов по Фонио:

  1. Подготовка пациента к анализу – забор крови не производят в состоянии алкогольного опьянения (уровень тромбоцитов наряду с лейкоцитами увеличении в 3-4 раза), а также при сильной физической усталости и наличии продолжительного стресса со всеми вытекающими. Эти состояния могут провоцировать чрезмерную выработку тромбоцитов, которая является исключительно периодической и не несет в себе информацию о реальном положении вещей. Перед забором крови лучше ничего не есть, а также отказаться от приема любых лекарств. Оптимальное время для взятия образца – 7-9 часов утра.
  2. Качество реактивов – при использовании некачественных реактивов могут присутствовать отклонения от нормы. В подобном случае пациенту предлагают сдавать анализ на Фонио трижды, с периодичностью 2-3 дня. Это позволит наиболее полно и точно оценить состояние здоровья, а также минимизировать погрешность.
  3. Особые состояния организма – при менструации у женщин, беременности, в лактационный период результативность методики стремительно снижается. Дело в том, что гормоны, которые управляют женским организмом, постоянно подстраиваются под биологические процессы, контролируя их функциональность. У мужчин такие состояния могут наблюдать при сильной физической нагрузке, особенно это касается спортсменов и тяжеловесов.

Выявить истинные проблемы со здоровьем поможет только комплексное обследование всего организма, предпосылкой проведения которого является неудовлетворительный результат анализа крови по Фонио.

Таким образом, данный метод исследования уровня тромбоцитов не только удобен и прост в проведении, но и позволяет получать точные результаты.

Исчисления одной капли крови можно сопоставить с литром или микролитром, поэтому сразу будут видны отклонения от нормы, если они есть. Стоимость процедуры невелика, а продолжительность ожидания результатов не превышает 3 часов.

Это позволяет быстро получить нужные данные в критических состояниях пациента, когда каждая секунда может стать последней.

Простота формулы позволяет самостоятельно исчислять уровень тромбоцитов, но на сегодняшний день большинство клиник пользуются специальными электронными микроскопами, способными производить все подсчеты и самостоятельно выдавать конечный результат.

Источник: http://servis-tent.ru/ruchnoj-podschet-trombocitov/

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.