Виды молекулярно-генетической диагностики

Содержание

Молекулярно генетический метод исследования в онкологии

Виды молекулярно-генетической диагностики

Наряду с гистологическим и иммуногистохимическим  исследованиями новообразований, молекулярно-генетические исследования рака все более плотно входят в арсенал врачей-онкологов.

Среди проводимых исследований опухолевых тканей молекулярно-генетические с каждым годом прибавляют свою долю.

И необходимость подобного рода анализов будет только расти.

Главным образом, выявление мутации генов необходимо для назначения дальнейшей таргетной терапии рака.

Это связано с тем, что использование подавляющего большинства таргетных препаратов, предполагает определение некой мишени, на которую будет воздействовать лекарственное средство.

Молекулярно генетические методы исследования позволяют выявить мутации в генах и определить на основании этого чувствительность опухоли к тем или иным таргетным препаратам.

В статье мы рассмотрим цели исследования для разных видов злокачественных новообразований.

Как проводится анализ на мутацию генов

Если же говорить о том, как происходит это исследование с точки зрения больного, и что ему для этого нужно сделать, то это выглядит достаточно просто.

На анализ предоставляется фрагмент опухоли, полученный в процессе биопсии либо во время операции.

Подходят фрагменты опухолей, удаленных даже несколько лет назад, при  условии что они должным образом были сохранены (в парафиновых блоках).

В лабораторию нужно предоставить как раз такой парафиновый блок.

Парафиновый блок  представляет из себя небольшой парафиновый слиток, размером с монету.

Врач возьмет фрагмент опухолевой ткани, выделит из него цепочку генов и определит какого рода мутации какого гена присутствуют в данном конкретном новообразовании конкретного пациента.

Далее, на основании полученных данных онколог сможет назначить пациенту подходящий таргетный препарат.

Определение мутации генов при онкологических заболеваниях делаются в лабораториях при крупных клиниках и научно-исследовательских институтах.

К сожалению, этот анализ не всегда назначается онкологами. Причины тому разные, бывает, особенно на периферии, что не все онкологи   достаточно разбираются в этой теме, либо их лечебное учреждение не имеет возможности отправить фрагмент опухоли больного на это исследование.

Ряд врачей, почему-то, не считает нужным назначать этот анализ, возможно, и потому, что не все лечебные учреждения в состоянии обеспечить пациента препаратами таргетной терапии, которые назначаются по его результатам.

В этом случае инициативу приходиться брать в свои руки больному или его родственникам, а также брать на себя соответствующие финансовые затраты.

Стоимость большинства из вышеперечисленных исследований находится в диапазоне от 5000 до 15000 рублей (по состоянию на 2017 год).

Как выглядит заключение по итогам анализа

Перед врачом-генетиком ставится цель исследования. Поэтому рассмотрим цели исследования для наиболее частых видов опухолей.

Лимфомы

Есть ряд подтипов В-крупноклеточных лимфом из активированных В-клеток и из В-клеток герминативного центра.

При молекулярно-генетическом исследовании лимфомы определяются мутации с-МYC, ВСL2,  ВСL6, ССND1

От общего уровня активности и от механизмов, которые приводят к гиперэкспрессии указанных генов, зависит прогноз и подход к лечению заболевания.

Рак молочных желез и яичников

При раке молочной железы и яичников определяются мутации BRCA1, BRCA2. Полученные результаты имеют прогностическое значение, а также позволяет определить риск заболеть раком молочной железы, если у родственниц есть рак яичников и молочной железы.

Также определяется мутация в случае, если у пациентки есть рак молочной железы или яичников. Эти данные используются для подбора наиболее эффективного лечения.

При этом различные лаборатории могут определить как наиболее часто встречаемые мутации BRCA1, BRCA2, так и выявить все возможные BRCA1,  BRCA2.

Разница в цене между первым и вторым вариантом может составлять 7-8 раз. Как правило, второй вариант нужен очень и очень редко, в большинстве случаев достаточно первого.

При раке молочной железы методом FISH определяется амплификация HER-2 neu. Это позволяет определить чувствительность опухоли к таргетному препарату «Герцептин».

Также этим методом определяется амплификация TOPO2A. Это необходимо для назначения таких препаратов, как, например, Пертузумаб, Лапатиниб, а также при назначении Герцептина.

Опухоли желудка

Те же самые исследование, а именно HER-2 neu  TOPO2A назначаются для определения чувствительности к Герцептину опухолей желудка.

Также при гастроинтестинальной стромальной опухоли желудка проводится исследование гена c-KIT, а именно 9,11,13,17 экзонов этого гена, а также 12,18 экзонов гена PDGFRa.

Немелкоклеточный рак легкого

При немелкоклеточном раке легкого определяются мутации EGFR. В частности определяются проблемы в 18-м, 19-м и 21 экзонах, а также T790M в 20-м экзоне.

Это необходимо для того, чтобы врач смог определить будут ли таргетные препараты, воздействующие на эпидермальный фактор роста опухоли эффективны для больного.

Также при этой форме рака определяется наличие и уровень  PD-L1. При положительном определении такого белка к пациенту может применять новейший препарат  Атезолизумаб (Тецентрик).

Этот препарат на данный момент считается прорывом в лечении немелкоклеточного рака легкого.

Уротелиальный рак

При уротелиальном раке долгое время не удавалось добиться очень серьезных, прорывных результатов именно в лекарственной терапии.

С появлением Тецентрика у таких пациентов появилась надежда на успешное лечение. Подробнее о Атезолизумабе читайте по ссылке.

Для определения возможности и эффективности  применения этого препарата необходимо исследование в  клетках опухоли белка  PD-L1.

Также определение PD-L1 и PD-L2  необходимо для назначения препарата  Ниволумаб (Опдиво).

Щитовидная железа

При планировании лечения медуллярного рака щитовидной железы имеет смысл выявление перестроек RET методом FISH, так как перестройки гена RET имеют большое прогностическое значение при этой болезни.

Колоректальный рак

Для лечения этого новообразования фармацевтическими компаниями предложено, пожалуй, самое большое количество таргетных препаратов.

Важно правильно подобрать необходимые. Для этого определяют второй, третий, четвертый экзоны KRAS, второй и третий экзоны NRAS  и мутацию 15-ого экзона BRAF. На основании этого врач подбирает наиболее эффективный таргетный препарат.

Также при колоректальном раке может определяться индекс микросателитной нестабильности (MSI). Этот индекс необязателен при назначении лечения, однако он идет как прогностический фактор. При наличии такой нестабильности лечение будет эффективнее примерно на 15%.

Также определяют мутацию PI3KCA. При ее определении врач понимает, что эффективность препаратов, нацеленных на эпидермальный фактор опухоли, будет ниже ожидаемой, поэтому предложит иной вариант лечения.

Меланома

Для подбора препаратов таргетной терапии определяется мутация 15 экзона гена BRAF, несколько реже – 11, 13 и 17 экзонов c-KIT, а также 2 и 3 экзонов гена NRAS.

Надо сказать, что при первичной меланоме, как правило, определяются BRAF мутации, c-KIT дополнительно определяются при метастазирующей меланоме.

Если обнаружатся мутации в  c-KIT, то будут применены дополнительные препараты.

Сейчас при лечении меланомы появляются очень хорошие таргетные препараты, которые позволяют перейти на совершенно другой уровень лечения меланомы, даже метастазированной. Но для этого нужно знать наличие клеточных мутаций.

Саркомы

Молекулярно-генетический анализ используется и при саркомах.

При синовиальной саркоме определяется перестройка SYT. Это исследование необходимо для окончательного подтверждения диагноза.

При саркоме Юинга определяется перестройка EWS.

Где проводится молекулярно генетическая диагностика

В интернете вы найдете большое количество лабораторий, которые предлагают свои услуги по определению мутации генов. Вплоть до того, что курьер от лаборатории может взять парафиновый блок у вас, либо вы его можете отправить в лаборатории. Как именно можно отправить, вам разъяснят в лаборатории.

Большинство исследований, которые проводят такие независимые лаборатории, проводятся на базе крупных клиник и НИИ Москвы и Санкт-Петербурга.

Хорошо зарекомендовала себя лаборатория 62 больницы города Москвы.

Молекулярная генетика в клинической онкологии сейчас активно развивается, однако, некоторые виды исследований, например, определение уровня PDL у нас в стране можно выполнить только в трех центрах, либо за границей.

Молекулярно генетические анализы и таргетная терапия – современные методы диагностики и лечения рака

Источник: http://www.onkolog-rf.ru/molekulyarno-geneticheskij-metod

Что такое методы молекулярной диагностики?

Виды молекулярно-генетической диагностики

Успехи в исследовании генома человека привели к созданию ряда новых медицинских направлений. Уже никого не удивляют фразы «Генетическое разнообразие человека», «Функциональная геномика», «Этические, правовые и социальные аспекты исследований генома человека».

«Генетизация» медицина произвела революционный переворот в изучении наследственных болезней, сложных инфекционных заболеваний, внедрению молекулярно-генетических технологий в медицине.

Что дала миру молекулярная медицина?

Хорошо известны практические достижения молекулярной медицины, напрямую связанные с широким внедрением новых молекулярных технологий для решения медицинских задач:

  • созданы уникальные методы молекулярной диагностики;
  • появилась геномная дактилоскопия, предиктивная медицина (предсказательная);
  • созданы фармакогеномика и генотерапия.

Характерными особенностями всего направления молекулярной медицины являются:

  • индивидуальный подход к больному, который гарантируют молекулярно генетические методы диагностики;
  • уникальный выбор стратегии профилактики, лечения больных, основывающиеся на генетических особенностях и уникальности каждого субъекта;
  • предупредительный (предиктивный) характер молекулярной медицины, поскольку профилактика и лечение может начинаться заблаговременно, до появления реальной клинической картины патологического процесса.

Общие сведения о молекулярной диагностике

Локализация и клонирование существующих последовательностей кДНК генов (комплементарных, синтезированных) предоставляет медикам принципиально новые возможности в диагностике наследственных заболеваний.

Используемые методы молекулярной диагностики позволяют исследовать различные формы одного и того же гена, образовавшиеся в результате мутации, как у самих пациентов, так и членов их семей. Исследованию могут быть подвергнуты и предполагаемые гетерозиготные носители патологических мутаций (пациенты, в потомстве которых четко видно расщепление признаков).

Молекулярная диагностика широко применяется в перинатальной практике, поскольку исследования с использованием молекулярных методов анализа проводятся на самой ранней стадии развития плода.

Точная и ранняя диагностика дает возможность выявить патологию до появления биохимических и клинических симптомов болезни. Досимптоматическая диагностика позволяет разработать тактику лечения, начать проведение упреждающей терапии.

Кроме того, молекулярно-генетический анализ позволяет эффективно выявить гетерозиготных носителей в семьях высокого риска, что стало важным фактором своевременной и эффективной профилактики наследственных болезней.

Несомненными преимуществами молекулярного медицинского анализа являются:

  • универсальность;
  • возможность использовать в исследованиях любые ДНК-содержащие ткани или клетки, причем анализ может быть произведен на любых стадиях индивидуального развития организма (онтогенеза), хоть с момента оплодотворения.

Этапы и варианты молекулярной диагностики

Молекулярно-генетические методы диагностики – это большая группа методов, предназначенных для определения вариаций в структуре изучаемого участка ДНК (аллеля, гена, региона хромосомы). Современные технологии позволяют даже расшифровать последовательность оснований.

В основу данных методов положены манипуляции, выполняемые с ДНК и РНК, а именно:

  1. Получение образцов ДНК либо РНК, что является начальным этапом исследований, что осуществляется:
    • путем выделения всей ДНК (тотальной или геномной) из предоставленного для анализа клеточного материала;
    • накопление определенных фрагментов, которые должны быть использованы в последующем анализе.
  2. Ферментативное разделение сложных цепочек дезоксирибонуклеиновой кислоты на отдельные фрагменты, представляющие из себя последовательность нуклеотидов различного размера (рестрикция ДНК) – является необходимым этапом в молекулярно-генетической диагностике.
  3. Электрофорез фрагментов ДНК, благодаря чему достигается разделение фрагментов для последующего исследования.
  4. Визуализация и идентификация фрагментов ДНК.

Диагностика инфекций молекулярно-генетическими методами

Своеобразной революцией в молекулярной диагностике стала разработка технологии полимеразной цепной реакции. Принцип ПЦР метода заключается в многократном удвоение ДНК/РНК, осуществляемом в лаборатории с помощью ферментов. Таким образом, образуется достаточное количество исследуемого материала для визуального анализа.

При проведении ПЦР – сущность метода позволяет копировать лишь участки ДНК/РНК, соответствующие заранее заданным параметрам, становится доступным не только высокоточная диагностика наследственных болезней.

Диагностика инфекций методом ПЦР позволяет выявить на ранней стадии:

  • ВИЧ-инфекцию и гепатиты А, В, С, G;
  • вирус герпеса, 1 и 2 типов;
  • мононуклеоз и цитомегаловирусную инфекцию;
  • туберкулез;
  • онкогенные вирусы (папиллома);
  • листериоз, кандидоз, боррелиоз;
  • инфекции, передающиеся половым путем (хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз);
  • клещевой энцефалит; хеликобактерную инфекцию.

Для диагностики хламидиоза широко применяется также метод лигазной цепной реакции (ЛЦР). В этом случае используется способность ДНК-лигаз восстанавливать фосфодиэфирные связи в одноцепочечных разрывах двухцепочечных молекул ДНК.

Метод лигазной цепной реакции широко используется при анализе урогенитальных, эндоцервикальных образцов. Особенно эффективен этот метод для выявления хламидиоза в моче у женщин. Надежность диагностики очень высокая, до 99%.

Источник: http://urolog.pw/st/metody-molekulyarnoy-diagnostiki

Молекулярно-генетические исследования, способы их проведения и виды

Виды молекулярно-генетической диагностики

Цель проведения молекулярно-генетических методов исследования – определение наличия модификаций и изме­нений в некоторых хромосомах, ДНК-участках или генах. Широкое использование на практике этот способ работы с ДНК получил в 70-80 гг. прошлого столетия.

Когда назначают молекулярно-генетические исследования Кому назначают молекулярно-генетические исследования Как проводится молекулярно-генетический тест

Когда назначают молекулярно-генетические исследования

Молекулярно-генетические исследования помогают диагностировать:

  1. Моногенные генетические заболевания;
  2. Вероятность развития онкологических болезней;
  3. Наличие факторов, провоцирующих мультифакторные болезни.

Определение риска развития онко-процессов при помощи молекулярно-генетического исследования выявляет:

  • Риск развития рака желудка и щитовидной железы;
  • Вероятность возникновения рака толстой кишки и ранних стадий этого заболевания;
  • Генетическую предрасположенность к развитию рака тела матки, яичников, молочной и предстательной железы;
  • Наличие рекомбинации генов ABL/BCR, выявляемых при лейкозах;
  • Наличие предпосылок, обеспечивающих эффективность противоопухолевой терапии гефатинибом при наличии немелко-клеточного рака .

Проводя молекулярно-генетические тесты на наличие генетически обусловленных предпосылок развития мультифакторных заболеваний, удается выявить риск развития:

С помощью этого метода оценивают метаболизм и оправданность применения тех или иных лекарственных препаратов.

Кому назначают молекулярно-генетические исследования

Молекулярно-генетические тесты показаны лицам:

  • страдающим бесплодием;
  • подвергающимся воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды;
  • имеющим в роду близких родственников, страдающих онкологическими, психическими, сосудистыми и эндокринными заболеваниями.

Как проводится молекулярно-генетический тест

Первый этап молекулярно-генетического анализа очень важный и заключается в получе­нии РНК и ДНК образцов, которые являют собой отдельные фраг­менты ДНК клетки или всю её цепочку. Для выделения необходимого количества фрагментов используют способ амплифицирования, то есть их размножения путем полимеразной цепной ре­акции (фермента­тивная репликация).

Для анализа молекул ДНК требуется их предварительное деление на части и обработка бактериальными эндонуклеазами (рестриктазами) – ферментами, которые могут разрезать двойную спираль ДНК на части по 4-6 пар.

Фрагменты ДНК разделяют по длине и размеру при помощи специального геля (полиакриламидного и агарозного), применяя электрофорез. Под действием последнего они  перемещаются вниз по гелю с разной скоростью, оставляя за собой дискретную полосу.

Молекулярно-генетические исследования наследственных патологий также ис­пользуют с целью изучения человеческого генома.

Блот-гибридизация по Саузерну позволяет в данном случае определить необходимые для этого особые фрагменты ДНК.

При этом вначале прибегают к денатурации ДНК, в результате чего получают фрагмен­ты в виде одной цепочки и их переносят на фильтр (нейлоновый или нитроцеллюлозный), который замочен в буферном растворе.

Гель, на котором находятся ДНК-фрагменты, переносят на фильтровальную бумагу с солевым раствором (с высоким %концентрации). Сверху на­кладывается по очереди нитроцеллюлозный фильтр и фильтровальная, но сухая бумага (для впитывания солевого раствора). В итоге одноцепочечные ДНК остаются на фильтре в таком же положении как на геле.

Для выявления необходимых фрагментов проводят процедуру гибридизации ДНК с клониро­ванным его фрагментом или радиактивным ДНК-зондом. Полученный результат этой процедуры обнару­живается посредством радиоавтографии, благодаря которой все комплементарные зонды после­довательности ДНК отражаются в ви­де радиоактивной полосы.

Метод Саузерна позволяет воссоздать рестрикционную карту гено­ма человека в определённой части гена. Это дает возможность обнаружить наличие любых дефектов в самом гене. Разработанные методы считаются довольно эффективными и позволяют проводить сверхточную диагностику наследственных заболеваний.

С этой целью из эмб­риональных клеток, которые содержатся в амниотической жидкости, выде­ляют ДНК. В последующем ее гибридизируют, применяя Саузерн-блоттинг с радиоактив­ным ДНК-зондом.

В итоге очень легко распознать аномальный эмб­рион, потому что его ДНК гибридизируется исключительно с ДНК-зондом, который является комплементарным мутантной последовательности.

Современная наука использует ряд методов для выявления мутаций. Все они делятся на косвенные и прямые молекулярно-генетические способы исследований.

Косвенные способы выявления мутаций используются в случае, если известно по­ложение гена на генетической карте, но не расшифрована его нуклеотидная последовательность.

Прямая диагностика бывает в нескольких видах:

  1. Секвенирование. Это техника выявления нуклеотидной по­следовательности для определения замены оснований в определенном фрагменте.
  2. Блот-гибридизация но Саузерну. Это рестриктный анализ, с помощью которого находят мутации, имеющие нарушения места рес­трикции.
  3. Аллелоспецифическая гибридизация с синтетическим зондом. Данный способ также позволяет выявить в геномной ДНК мутации.
  4. Электрофорез двухцепочечной ДНК в геле (равномерно денатурирующем, нейтральном). Оно являет собой расщепление ДНК на химическом и ферментативном уровне. В тех местах, где непра­вильно сшиты основания обычно определяют группу мутаций.
  5. Изучение электрофоретической подвижности ДНК-мутантных молекул.
  6. Анализ синтезируемого белка с помощью электрофореза. О наличии мутаций судят по изме­нению подвижности белка в системе in vitro.

Также мутации диагностируют с помощью определения полиморфных фрагментов (рестрикционных по длине) в геноме. Для этого применяют ту же технику блот-гибридизации по Саузерну.

Среди прочих типов полиморфизма ДНК также выделяют микросателлиты. Они являют собой корот­кие после­довательности ДНК (тандемно повторяющиеся моно-, ди-, три- и тетрануклеотидные). Они служат маркерами дефектных мутаций или маркерными локусами аллельных вариантов гена в исследовании.

Ген, который ответственный за развитие хореи Гентингтона, тя­желой патологии, был открыт в 1993 г. При этой болезни наблюдается снижение интеллектуального развития, расстройство движений ЦНС у людей после 40 лет. Болезнь является наследственной и передается по аутосомно-доминантному типу, имеет 100 % пенетрантность. Расположен ген болезни в 4-й хромосоме, в корот­ком плече.

Этот ген включает в себя нуклеотидную последовательность в виде много­кратного повторения нуклеотида ЦАГ. У здоровых людей таких повторов в норме 11-34, больные хореей имеют 37-86, но обычно 45. Из этого следует вывод, что хорея Гентингтона – это наследственная патология с мутацией ге­на в многократном увеличении числа его копий (экспансия).

Викторова Юлия, акушер-гинеколог

6,395  6 

(47 голос., 4,00 из 5)
Загрузка…

Источник: https://okeydoc.ru/molekulyarno-geneticheskie-issledovaniya/

Молекулярно-генетические методы диагностики

Виды молекулярно-генетической диагностики

МУЗ «Первая городская клиническая больница скорой медицинской помощи»

СЕВЕРНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

КУРС КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Молекулярно-генетические методы диагностики

Руководитель курса

Проф. Воробьёва Н.А

Выполнила

врач-интерн КДЛ

Петрова Л.В

г. Архангельск2009 г.

Оглавление

Введение

Врождённая наследственная патология вносит всё более возрастающий вклад в структуру младенческой смертности, детской заболеваемости и инвалидности. Глубокие изменения в деятельности ведущих органов и систем детского организма, возникающие вследствие генетически детерминированных состояний, способствуют формированию ранних повреждений у детей.

В решении проблемы предупреждения врождённых и наследственных заболеваний у детей, и в первую очередь 2 основных групп заболеваний – врождённых пороков развития (ВПР) и хромосомных аномалий, большая роль принадлежит научно-практическим учреждениям медико-генетического профиля – медико-генетическим консультациям (МГК) местного и регионального масштаба, обеспечивающим практическую реализацию профилактических мероприятий.

Можно выделить несколько уровней профилактики врождённых и наследственных заболеваний:

I. Прегаметический

· охрана репродуктивного здоровья;

· охрана окружающей среды;

II. Презиготический

· МГК;

· искусственная инсеминация;

· периконцепционная профилактика;

III. Пренатальный

· внедрение всех видов пренатальной диагностики;

IV. Постнатальный

· ранняя идентификация патологии;

· лечение;

· профилактика инвалидизирующих расстройств.

Расшифровка генома человека, первый этап которого завершился в 2000 году созданием «чернового» варианта первичной нуклеотидной последовательности гигантской молекулы ДНК, явилась предпосылкой возникновению нового научно-практического направления – молекулярной медицины, в которой проблемы диагностики, профилактики и лечения решаются на молекулярном уровне при помощи нуклеиновых кислот (ДНК, РНК) и продуктов их экспрессии (белков). Методологическую основу молекулярной медицины составляют современные представления о структуре генома человека, его генах, их функциональных взаимодействиях, о так называемых генных сетях – генных ансамблеях, обеспечивающих различные функции организма в норме и при патологии.

Характерными особенностями молекулярной медицины как медицины, основанной на расшифровке генома человека, является её индивидуальный характер. Она направлена на коррекцию патологического процесса у вполне конкретного человека с учётом уникальных особенностей вполне конкретного генома.

Её другая важная особенность – выраженная профилактическая направленность. Полные сведения о геноме могут быть получены задолго до начала заболевания.

Отсюда соответствующие коррективы и профилактические мероприятия могут полностью ликвидировать или в значительной мере предупредить развитие тяжёлого заболевания.

Внедрение молекулярной медицины в практическое здравоохранение требует овладения знаниями молекулярной биологии и генетики не только учёными всех разделов медицинской науки, но и врачами разных специальностей, в том числе акушерами и гинекологами.

1 Актуальность темы

В условиях улучшения медицинского обслуживания всё больше больных с наследственными заболеваниями достигают репродуктивного возраста и претендуют на возможность иметь здоровое потомство.

Однако у женщин с наследственными заболеваниями течение беременности и родов нередко осложнено, т.к. в этот период меняются клинические проявления многих наследственных заболеваний, чаще в худшую сторону.

В таких случаях нередко нарушается процесс вынашивания беременности и развития плода.

Значительную долю больных гинекологической клиники составляют пациентки с нарушениями менструальной и генеративной функций.

Участие хромосомных и генных мутаций в генезе значительной части заболеваний несомненно.

Выявление наследственного генеза нарушений репродуктивной системы позволяет оптимально проводить их коррекцию, а в ряде случаев прекратить безуспешную борьбу с бесплодием и сохранить здоровье женщины.

Вместе с тем появление в арсенале гинекологов средств, стимулирующих овуляцию, позволяет избавить от бесплодия таких больных. Однако стимуляция овуляции без учёта рекомендаций генетика может способствовать накоплению патологических мутаций в популяции, ухудшая генофонд и увеличивая частоту врожденной и наследственной патологии.

Перечисленные выше факторы требуют создания в ведущих клинических центрах акушерства и гинекологии медико-генетической службы. Основным направлением работы отделения клинической генетики является профилактика врожденной и наследственной патологии у плода и новорожденного.

Основными причинами обращения за медико-генетической консультацией послужили (в порядке убывающей частоты):

– возраст беременной старше 35 лет;

– нарушения менструальной и генеративной функций, в том числе привычное невынашивание беременности;

– наличие в семье или в родословной ребенка с врожденным пороком развития, хромосомным и моногенным синдромом, антенатальная гибель плода, мертворождение;

– неблагоприятные воздействия на плод во время беременности (лекарственные препараты, вирусная и бактериальная инфекция, прием алкоголя, наркотиков, проф. вредности и пр.);

– сочетание беременности и экстрагенитальной патологии;

– уточнение диагноза наследственного заболевания;

– прочие сочетанные показания.

Современная пренатальная диагностика состоит как минимум из 3 этапов:

I этап – медико-генетическое консультирование, во время которого формируется группа высокого риска по врожденной и наследственной патологии плода;

II этап – скринирующий – предусматривает обследование всех или почти всех беременных с помощью неинвазивных методов: ультразвукового сканирования и анализа маркерных сывороточных белков α-фенопротеина (АФП), хорионического гонадотропина (ХГ) в крови в наиболее информативные сроки;

III этап – инвазивная пренатальная диагностика для точного определения хромосомных и ряда моногенных заболеваний плода.

Цель настоящего обзора: анализ как существующих методических подходов в пренатальной диагностике (ПД) хромосомопатий, так и ее принципиально новых направлении.

2 Пренатальная диагностика наследственных болезней

Предимплантационная генетическая диагностика (ПГД) представляет собой совокупность методов, позволяющих проводить анализ наследственных заболеваний у эмбриона до его имплантации. Благодаря такой диагностике супружеские пары, имеющие риск передачи по наследству генетической патологии, получают возможность родить здорового ребенка.

У делящегося эмбриона invitro осуществляют биопсию одной или двух клеток (бластомеров), что не влияет на его жизнеспособность. На этом материале проводят диагностику различных наследственных заболеваний.

Если исследованная клетка не содержит генетических аномалий, эмбрион считают здоровым и его можно имплантировать матери.

Таким образом, в результате ПГД снижается риск развития определенных генетических заболеваний, что позволяет рассматривать этот вид исследования как альтернативу пренатальной диагностике при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО).

В настоящее время более чем в 50% случаев ПГД проводят с использованием молекулярно-цитогенетических методов с целью обнаружения анеуплоидии по хромосомам 13, 16, 18, 21, 22, X и V как наиболее частой генетической аномалии, выявляемой у эмбрионов. Использование метода FISH на интерфазном ядре позволяет выявить численную патологию хромосом у эмбриона.

Более сложной задачей является обнаружение патологии кариотипа, возникающей в результате сбалансированных структурных хромосомных аномалий (транслокаций, инверсий, инсерций) у родителей.

Эта задача решается путем получения специфических ДНК-зондов практически на все хромосомные районы и проведения FISH-анализа.

Возможно также использование таких методов молекулярной цитогенетики, как полное окрашивание флюорохромом аномальной хромосомы (chromosomepainting), использование множественного флюоресцентного кариотипирования (M-F1SH), спектроскопического анализа кариотипа (SKY-FISH) и сравнительной геномной гибридизации. Однако проблема заключается в том, что указанные методы исследования трудоемки, дорогостоящи, требуют значительных временных затрат и позволяют выявить только хромосомную патологию. Кроме того, необходимо учитывать технические моменты хромосомного анализа:

1) потеря единственной клетки во время фиксации;

2) неполное удаление цитоплазмы, что может повлиять на эффективность гибридизации и интерпретацию результатов;

3) недостаточная распространенность хроматина, что может привести к наложению гибридизационных сигналов;

4) потеря микроядер, в результате чего возможно ложное заключение о наличии моносомии.

Одним из методов, позволяющих не только оценить кариотип эмбриона, но и провести ДНК-диагностику, является последовательный FISH- и ПЦР-анализ на единственной фиксированной клетке.

Источник: http://MirZnanii.com/a/150706/molekulyarno-geneticheskie-metody-diagnostiki

Поделиться:
Нет комментариев

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.

×
Рекомендуем посмотреть